微生物限度检查有哪些常见方法？

       微生物限度检查是评估非无菌药品、食品、化妆品等产品中微生物污染程度的重要手段，通常包括微生物计数检查（定量）和控制菌检查（定性）两部分。根据样品性质（如是否含抑菌成分、剂型、溶解性等），可选择不同的检测方法。以下是常见的微生物限度检查方法：
       一、微生物计数检查常用方法
       1、薄膜过滤法（Membrane Filtration Method）
       ·适用对象：含抑菌成分、难溶性或高浓度样品（如抗生素、注射剂等）。
       ·原理：将样品通过0.45μm滤膜过滤，微生物被截留在膜上，再用冲洗液去除抑菌物质，将滤膜贴于培养基上培养并计数。
       ·优点：可有效去除干扰物质，回收率高。
       2、平皿计数法（倾注法，Pour Plate Method）
       ·适用对象：水溶性、无抑菌活性的供试品（如普通口服液、片剂溶液等）。
       ·原理：将稀释后的样品与熔化的琼脂培养基混合，冷却凝固后培养，计数菌落。
       ·注意：操作温度需控制在45℃以下，避免热敏感微生物失活。
       3、涂布法（Spread Plate Method）
       ·适用对象：对热敏感的微生物（如某些酵母菌、霉菌）或需观察典型菌落形态的样品。
       ·原理：先将培养基倒入平皿凝固，再将稀释样品涂布于表面，培养后计数。
       ·优点：避免高温对微生物的损伤。
       4、可能数法（MPN法，Most Probable Number）
       ·适用对象：微生物含量极低、分布不均或难以用平板计数的样品（如中药材、水质、某些乳制品）。
       ·原理：基于统计学模型，通过多个稀释度接种液体培养基，根据阳性管数查MPN表估算微生物数量。
       ·特点：灵敏度较低但适用于特殊样品。

       二、控制菌检查（定性检测）
       1、用于检测特定致病菌或指示菌，常见目标菌包括：
       ·大肠埃希菌（Escherichia coli）
       ·金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）
       ·铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）
       ·沙门氏菌（Salmonella spp.）（如婴幼儿食品、中药饮片等）
       ·梭菌（Clostridium spp.）
       2、常用方法：
       ·直接接种法：将样品直接接种至选择性增菌培养基，经培养后分离鉴定。
       ·增菌-分离-确证三步法：符合《中国药典》等法规要求的标准流程。
       三、方法选择依据
       ·样品是否具有抑菌性
       ·样品的物理状态（液体、固体、半固体）
       ·微生物的预期种类与数量
       ·是否符合药典或国家标准（如《中国药典》四部通则1105、1106）
       四、补充说明
       ·对于含抗菌成分的样品，常需使用中和剂或采用薄膜过滤法以消除抑菌干扰。
       ·所有操作应在洁净环境*（如B级背景下的A级层流）中进行，防止外源污染。